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贴壁细胞的消化:
1、吸去培养液,用无菌的PBS、Hanks液或无血清培养液洗涤细胞一次,以去除残余的血清。
2、加入少量胰酶细胞消化液(含酚红),略盖过细胞即可,室温放置30秒至2分钟。不同的细胞消化时间有所不同3、显微镜下观察,细胞明显收缩,并且肉眼观察培养器皿底部发现细胞的形态发生明显的变化,或者用枪吹打胞发现细胞刚好可以被吹打下来;此时吸除胰酶细胞消化液;加入含血清的完全细胞培养液,吹打下细胞,即可接用于后续实验。
4、如果发现消化不足,则加入胰酶细胞消化液重新消化。
5、如果发现细胞消化时间过长,未及吹打细胞,细胞已经有部分直接从培养器皿底部脱落,直接用胰酶细胞培液把细胞全部吹打下来。1000-2000g离心1分钟,沉淀细胞,尽量去除胰酶细胞消化液后,加入含血清的完全养液重新悬浮细胞,即可用于后续实验。
组织的消化:
不同的组织需要消化的时间相差很大,通常以消化后可以充分打散组织为宜。
1、 在使用胰酶细胞消化液的过程中要特别注意避免消化液被细菌污染。
2、 胰酶细胞消化液消化细胞时间不宜过长,否则细胞铺板后生长状况会较差。
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