本产品适用于 SDS-PAGE(SDS-变性聚丙烯酰胺凝胶电泳时作蛋白质上样用。其主要成份为 SDS,DTT,溴酚蓝,缓冲盐溶液等。SDS 可与蛋白质结合使蛋白质-SDS 复合物上带有大量的负电荷,这时蛋白质本身的电荷完全被 SDS 掩盖,消除了各种蛋白质本身电荷的差异;SDS 还可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级和三级结构。DTT 可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质结构,消除了蛋白结构之间的差异。最终无电荷及结构上差异的蛋白(亚单位),电泳速度只是与其分子量大小有关。溴酚蓝用作电泳时的指示剂,可大概指示电泳结束的时间。
使用方法:
1、在室温或不超过37℃的水浴中溶解SDS-PAGE上样缓冲液(5X)。水浴溶解后立即室温存放,尽量避免长时间置于水浴中。
2、按照每4ul蛋白样品加入1ul蛋白上样缓冲液(5X)的比例,混合蛋白样品和蛋白上样缓冲液(5X)。
3、100℃或沸水浴加热5-10分钟,以充分变性蛋白。
4、冷却到室温后,直接上样到SDS-PAGE胶加样孔内即可。
5、通常电泳至蓝色染料到达胶的底端处附近即可停止电泳。
注意事项:
1、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)中含少量DTT,有轻微刺激性气味,但不含剧毒的巯基乙醇。
2、SDS-PAGE蛋白上样缓冲液(5X)必须完全溶解后再使用。
3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。